Установлено, что при вирусных гепатитах, в том числе при хроническом гепатите С (ХГС), развивается универсальный механизм гибели гепатоцитов через усиленную выработку активных форм кислорода, обусловливающую чрезмерную липопероксидацию мембранных структур [1]. Основную функцию защиты при активации липопероксидации выполняет система антиоксидантной защиты клеток, недостаточность которой становится одним из факторов активации прооксидантных систем. В первую линию защиты клеток от агрессивного действия свободных радикалов входит система глутатиона, состоящая из глутатиона общего и его восстановленной и окисленной форм и глутатионзависимых ферментов: глутатионтрансферазы (ГТ), глутатионредуктазы (ГР) и глутатионпероксидазы (ГП) [2–4]. Подавление активности одного из глутатионзависимых ферментов может привести к избыточному накоплению активных форм кислорода и повреждению мембран гепатоцитов [5–7].

Целью исследования явилось изучение у больных ХГС состояния антиоксидантной системы во взаимосвязи с интоксикационным синдромом.

Материалы и методы

Обследовано 128 пациентов с ХГС в стадии реактивации в возрасте от 19 до 45 лет, среди них было 54 (42%) мужчины и 74 (58%) женщины. Диагноз был установлен на основании клинико-лабораторных данных, а также результатов ПЦР (РНК HCV) и ИФА (анти-HCV). Контрольную группу составили 20 практически здоровых людей с отсутствием маркеров гепатитов. По генотипам вируса гепатита С (HCV) больные распределились следующим образом: генотип 1 выявлен у 47 (36,8%) больных, генотип 2 – у 54 (42,1%), генотип 3 – у 27 (21,1%). Длительность заболевания составляла от 5 до 15 лет.

Состояние антиоксидантной защиты определяли по показателям активности глутатиона и глутатионзависимых ферментов. Общий, восстановленный и окисленный глутатион определяли по В.Г. Чернышову [8]. Активность глутатионзависимых ГП, ГР и ГТ определяли методом С.Н. Власовой и соавт. [9].

Вирусную нагрузку и генотип HCV определяли методом ПЦР в режиме реального времени Rotor Gene («Corbet Research», Авcтралия) с использованием наборов «АмплиСенс РИБО-сорб» (ЦНИИЭ, Россия).

Результаты исследования обработаны при помощи пакета программ Statistica 6.0 Microsoft с применением t-критерия Стъюдента.

Результаты и обсуждение

Анализ полученных результатов показал достаточно широкие разбросы изучаемых показателей системы глутатиона. При дополнительном анализе историй болезни установлено, что у большинства больных маркеры HCV были «случайной» находкой. На протяжении ряда лет наблюдалось волнообразное нарастание симптомов интоксикационного синдрома и больные, наблюдаясь у невропатологов, кардиологов, периодически получали в основном метаболическую терапию. Учитывая эти наблюдения, из вариационных рядов были исключены показатели больных, получавших в предшествующие полгода метаболическую терапию, результаты которой могли отразиться на состоянии системы глутатиона, обусловленном непосредственно хроническим инфекционным процессом.

Для изучения возможной при ХГС взаимосвязи состояния глутатионовой системы с выраженностью синдрома интоксикации нами условно проведена его градация. У обследованных больных синдром интоксикации оценивали по наличию следующих симптомов: слабость периодическая, слабость постоянная, быстрая утомляемость после обычной физической нагрузки, повышенная раздражительность, снижение памяти, депрессия, отсутствие чувства бодрости после ночного сна, нарушение сна, ломота в мышцах, периодическое познабливание. По количеству регистрируемых симптомов больные были разделены на 3 группы: I группа – наличие 1–3 симптомов, II группа – 4–6 симптомов, III группа – 7–10 клинических симптомов интоксикации.

Результаты проведенных исследований показали, что у больных ХГС изменения показателей глутатионовой системы взаимосвязаны с выраженностью интоксикационного синдрома и имеют разнонаправленный характер (табл. 1). Как видно из данных, представленных в таблице, уровни общего глутатиона и его восстановленного варианта достоверно ниже показателей контрольной группы. При этом наиболее низкие показатели зарегистрированы у больных с выраженным интоксикационным синдромом. Изменения в показателях окисленного глутатиона имеют аналогичное направление, но достоверность изменений отмечена лишь в III группе. В отличие от глутатиона изменения активности глутатионзависимых ферментов неоднозначны. Так, активность ГР возрастает у больных ХГС с наименьшей клинической интоксикацией, но при нарастании интоксикационного синдрома она начинает снижаться, и у больных III группы это снижение уже носит достоверный характер. Активность ГП у всех обследованных больных достоверно ниже контрольных показателей, и выраженность этих изменений нарастает с нарастанием интоксикационного синдрома. Показатели ГТ у больных I группы с наименьшим набором симптомов интоксикации достоверно не отличаются от показателей в контрольной группе, но с увеличением числа регистрируемых симптомов (во II и III группах) наблюдается достоверное снижение активности фермента (см. табл. 1).

Далее нас интересовал вопрос взаимосвязи выраженности супрессии глутатионовой антиоксидантной защиты и клинической манифистации интоксикационного синдрома. Анализ полученных данных показывает, что из трех глутатионзависимых ферментов наиболее связана с проявлениями симптомов интоксикации ГП. Учитывая вышеизложенное, нами проведен анализ степени снижения по отношению к контролю показателей ГП в общей группе больных ХГС и условно выделены 3 степени глутатионовой недостаточности: компенсированная – снижение до 20% от контрольных показателей, субкомпенсированная – снижение от 20 до 40% и декомпенсированная – снижение свыше 40%. Дальнейший анализ показал, что каждую из групп, в которую вошли больные с относительно однородной выраженностью интоксикации, составляют больные с различной степенью глутатионовой недостаточности. Как видно из данных табл.2, в I группе больных ХГС с наименьшим набором симптомов интоксикации у 81,2% пациентов снижение показателей ГП регистрируется на уровне компенсации, а у 18,8% пациентов, несмотря на минимальную выраженность интоксикационного синдрома, степень снижения уровня ГП достаточно выраженная. У больных II группы наблюдается аналогичная закономерность: у 25% из них уровень снижения ГП не соответствует выраженности интоксикационного синдрома. И лишь в III группе у больных с выраженным синдромом интоксикации показатели ГП достаточно однородны – снижение их уровня у всех больных соответствует степени декомпенсации. Таким образом, по данным, представленным в табл. 2, видно, что у больных ХГС клиническая манифестация интоксикационного синдрома по степени выраженности «отстает» от степени снижения уровня ГП.

Снижение уровня глутатиона в значительной степени определяется изменением активности ферментных систем, регулирующих соотношение его окисленной и восстановленной форм. При этом глутатионзависимые ферменты для осуществления своих антиоксидантных функций используют восстановленный глутатион [5, 6, 10]. У больных ХГС отмечается выраженная депрессия активности ГП. Существует мнение, что многообразие механизмов реализации антиоксидантных ферментов и их взаимозаменяемость не позволяют выделить один из них [5]. Однако другие исследователи считают ГП одним из важнейших компонентов антипероксидной системы, поскольку она функционирует на двух из четырех линий ферментативной защиты от активных кислородных соединений и продуктов пероксидации, играет определяющую роль в защите мембранных структур клетки [11, 12]. ГП в большинстве тканей является единственным или главным пероксидазным ферментом и локализована в цитозоле и матриксе митохондрий [6, 10]. Установлено, что недостаточность именно ГП может быть причиной ряда заболеваний человека [6, 12]. На фоне снижения уровней глутатиона и ГП у обследованных больных наблюдается повышение активности ГР. Она обеспечивает биорегенерацию восстановленного глутатиона, и стимуляцию ее активности можно расценивать как компенсаторную реакцию поддержания уровня глутатиона, необходимого для осуществления адаптационных процессов в организме больного [3, 13, 14].

Таким образом, результаты проведенных исследований показали, что при ХГС отмечаются глубокие нарушения системы глутатиона, проявляющиеся снижением уровня общего глутатиона, его окисленной и восстановленной форм, угнетением активности глутатионзависимых ферментов и срывом гомеостатических функций антиоксидантных процессов, обуславливающих, возможно, формирование необратимых изменений в ткани печени.

Выводы

У обследованных больных ХГС наблюдается достоверное снижение уровней общего глутатиона, его окисленной и восстановленной форм и разнонаправленные изменения активности глутатионзависимых ферментов – ГР, ГП и ГТ.

В группах обследованных больных имеется достоверная взаимосвязь степени изменений показателей глутатиона и глутатионзависимых ферментов с выраженностью синдрома интоксикации.

Изменения активности ГП у части больных ХГС происходят на субклиническом уровне.