В России, как и во всем мире, эпидемическая ситуация по хроническому гепатиту С на сегодняшний день весьма неблагополучна [1], что убедительно подтверждается его широкой распространенностью, все более частой регистрацией среди лиц молодого возраста, значительной ролью в формировании цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы [2–4]. Высокая заболеваемость, поражение не только взрослого трудоспособного населения, но и детского контингента, определяют актуальность данной проблемы и ее трансформацию из медицинской в медико-социальную [5].

В настоящее время морфофункциональные поражения печени больных хроническими гепатитами оцениваются (в том числе и у детей) в основном по материалу, получаемому при пункционной биопсии [6, 7]. Процедура подобного рода далеко не безразлична для больного, особенно, для ребенка. Поэтому активно продолжается поиск новых, менее травматичных методов обследования, позволяющих уточнить степень поражения печени при данных патологических состояниях. Приоритетным становится поиск маркерных показателей, способных отражать характер изменений в печени при этом заболевании по материалу, полученному от больного, технически более простыми и менее инвазивными способами.

Сегодня не вызывает сомнений тот факт, что в патогенезе хронического гепатита С важная роль принадлежит иммунной системе, ее способности к распознаванию возбудителя и дальнейшему формированию полноценного иммунного ответа [8–10]. Физиологической единицей, в первую очередь контактирующей с вирусом, является иммунокомпетентная клетка, функциональное состояние которой и обусловливает адекватность реагирования. Проявление в полном объеме функциональных возможностей лимфоцитов, как и любой другой клетки организма, в значительной степени определяется ее внутриклеточным метаболизмом, обеспечиваемым, в числе прочего, определенным уровнем активности ферментов [11]. Использование энзиматических параметров, определяемых в ткани печени при разных стадиях хронизации гепатита С, и характер их соотношения с аналогичными показателями лимфоцитов при данном заболевании позволит, на наш взгляд, оценить изменения метаболизма в печеночной ткани, так как известно, что внутриклеточный обмен в лимфоцитах способен отражать указанные процессы целостного организма [12].

Цель наших исследований – изучение активности ферментов в клетках печени и лимфоцитах крови у детей, больных хроническим гепатитом С, и определение зависимости этих параметров от стадии хронизации заболевания.

Материалы и методы

Обследовано 26 детей в возрасте от 12 до 16 лет с диагнозом «хронический гепатит C», который был установлен в условиях специализированного стационара с помощью набора стандартных клинико-биохимических и иммуноферментных методов исследования и подтвержден морфологически при пункционной биопсии печени (под контролем УЗИ) с учетом гистологического индекса степени активности (ГИСА), а также гистологического индекса стадии хронизации (ГИСХ) – по В.В. Серову [13]. У 13 детей определена 2-я стадия хронизации процесса (слабая или умеренная степень активности заболевания с умеренно выраженными фиброзными изменениями в печени) и еще у 13 – 3-я стадия (слабая или умеренная степень активности с тяжелым фиброзом печени).

Материал, полученный при биопсиях, использовался и для измерения в ткани печени активности ферментов биолюминесцентным методом [14], при помощи которого определяли показатели активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ), глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Г-3-ФДГ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), НАД- и НАДФ-зависимой изоцитратдегидрогеназы (НАДИЦДГ и НАДФИЦДГ), НАД- и НАДФ-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАДГДГ и НАДФГДГ), НАД- и НАДФ-зависимой малатдегидрогеназы (НАДМДГ и НАДФМДГ), а также глутатионредуктазы (ГР). Активность ферментов в клетках печени выражалась в микроединицах на 1 микрограмм ткани печени (мкЕ/мкг).

Перечисленные показатели были изучены и в лимфоцитах, выделенных из венозной крови этих же больных на градиенте плотности (ρ = 1,077 г/мл) фиколл-верографина [15]. Активность ферментов в лимфоцитах выражалась в микроединицах на 10 000 клеток (мкЕ/10 000 кл).

Полученные данные обработаны методами статистического анализа, используемыми в биологии и медицине, с применением пакета прикладных программ Statistica [16]. В таблицах представлены среднегрупповые показатели (М) и ошибка средней (m). Достоверность различий оценивалась с помощью непараметрического критерия Манна–Уитни (U).

Результаты и обсуждение

В результате проведенных исследований выявлены достоверные различия между ферментными показателями клеток печени в группах больных, различающихся по стадиям хронизации инфекционного процесса (табл. 1). Установлено, что уровни активности Г-6-ФДГ и НАДФМДГ при 3-й стадии хронизации достоверно выше, чем при 2-й. В то же время активность ГР при 3-й стадии достоверно ниже, чем при 2-й.

Предполагается, что интенсивность реакций пентозофосфатного пути метаболизма в клетках печени у детей при 3-й стадии хронизации гепатита С более выражена, чем при 2-й (уровень Г-6-ФДГ больше при 3-й стадии). Кроме того, повышается интенсификация конечных этапов цикла трикарбоновых кислот, позволяющая переводить часть малата, образующегося в цикле Кребса, в пируват (активность НАДФМДГ при 3-й стадии выше). В то же время при 3-й стадии снижается уровень защиты клеток от процессов перекисного окисления липидов: снижается активность ГР – фермента антиоксидантной глутатионовой системы. Учитывая роль ГР в транспорте аминокислот в клетку, вероятно, что их поступление в клетки печени у детей при 3-й стадии меньше, чем при 2-й.

При сравнении активности ферментов в лимфоцитах крови у больных детей с разными стадиями хронизации гепатита С также выявлены достоверные различия в исследованных показателях (табл. 2). Установлено, что активность Г-6-ФДГ и ЛДГ в лимфоцитах у детей с 3-й стадией хронизации выше, чем у детей со 2-й стадией. В то же время показатели активности НАДФГДГ и ГР при 3-й стадии ниже, чем при 2-й.

Вероятно, реакции пентозофосфатного пути метаболизма в лимфоцитах крови у детей при 3-й стадии хронизации гепатита С более выражены, чем при 2-й (выше активность Г-6-ФДГ при 3-й стадии). Кроме того, при 3-й стадии происходит более интенсивное образование пирувата за счет лактата (уровень ЛДГ больше при 3-й стадии). Наряду с этим, при 3-й стадии снижается поступление в цикл Кребса субстратов с аминокислотного обмена (уровень НАДФГДГ меньше при 3-й стадии). Также при 3-й стадии ниже уровень реакций системы глутатионовой антиоксидантной защиты (меньше активность ГР).

При сравнении энзиматических показателей, полученных в лимфоцитах, с аналогичными параметрами гепатоцитов выявляется достоверное повышение уровня активности Г-6-ФДГ и снижение активности ГР при нарастании тяжести процесса как в лимфоцитах крови, так и в клетках печени. Наблюдается и недостоверное повышение уровней Г-3-ФДГ и НАДИЦДГ при 3-й стадии хронизации по сравнению со 2-й стадией (см. табл. 1 и 2) и в лимфоцитах, и в гепатоцитах. Все это позволяет предположить, что ферментные показатели лимфоцитов отражают в определенной степени специфику и направленность изменений метаболических процессов, происходящих в клетках печени при данной патологии, что, по-нашему мнению, может являться основой для разработки новых диагностических подходов при этом заболевании.

Выводы

1. Активность ферментов в клетках печени у детей 12–16 лет, больных хроническим гепатитом С, зависит от стадии хронизации заболевания. Установленные нами особенности ферментной активности свидетельствуют о более глубоких метаболических изменениях в клетках печени, приводящих, вероятно, к более выраженным функциональным нарушениям в работе этого органа при 3-й стадии хронизации гепатита С по сравнению со 2-й стадией.

2. Энзиматическая активность в лимфоцитах крови у детей 12–16 лет с хроническим гепатитом С также зависит от стадии хронизации инфекционного процесса. Выявленные изменения активности ферментов предполагают наличие более выраженных метаболических нарушений в лимфоцитах при 3-й стадии хронизации гепатита С по сравнению со 2-й стадией, что, вероятно, сказывается на эффективности иммунного ответа при данной патологии, адекватность которого зависит от степени ее тяжести.

3. И в клетках печени, и в лимфоцитах крови у детей при хроническом гепатите С наблюдаются идентичные по своей направленности изменения активности ряда ферментов, обусловленные стадией хронизации заболевания. Характер соотношения показателей энзиматической активности в гепатоцитах с аналогичными параметрами в лимфоцитах позволяет утверждать, что ферментные показатели лимфоцитов отражают специфику и направленность изменений метаболических процессов, происходящих в ткани печени детей, больных хроническим гепатитом С.