Разработка дот-анализа для выявления антител к вирусу клещевого энцефалита с применением рекомбинантного EDIII-ВКЭ антигена и IgY-антител


DOI: https://dx.doi.org/10.18565/epidem.2024.14.2.63-9

Полтавченко А.Г., Филатов П.В., Ерш А.В., Ушкаленко Н.Д., Шаньшин Д.В., Колосова Е.А., Щербаков Д.Н.

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, р.п. Кольцово, Новосибирская область, Россия
Цель исследования. Оценка эффективности применения рекомбинантного аналога домена III оболочечного гликопротеина Е вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) (EDIII-ВКЭ) и куриных IgY-антител при разработке диагностического набора для выявления IgG к ВКЭ методом дот-анализа.
Материалы и методы. Изготовлены зонды на основе коллоидного золота и вторичных иммунореагентов (Au-SpA, Au-SpG, Au-IgG-a/Hum и Au-IgY-a/Hum) и проведено исследование их в дот-анализе иммуноглобулинов человека классов А, М и G. На основе зондов и EDIII-ВКЭ созданы экспериментальные наборы для дот-иммуноанализа IgG к ВКЭ.
Результаты. Экспериментальная оценка характеристик наборов с использованием панелей образцов сывороток крови, содержащих и не содержащих IgG к ВКЭ, а также панелей образцов, содержащих антитела к возбудителям других флавивирусных инфекций (лихорадка денге и желтая лихорадка) показала 100% чувствительность и специфичность дот-анализа, что свидетельствует о высокой селективности рекомбинантного антигена EDIII-ВКЭ. Зонды на основе поликлональных IgY-a/Hum не уступают в чувствительности и обеспечивают на 10–20% более интенсивный оптический сигнал по сравнению с зондами на основе мышиных моноклональных IgG-а/Hum.
Заключение. Зонды на основе IgY-a/Hum и рекомбинантный антиген EDIII-ВКЭ можно рассматривать в качестве перспективных реагентов для анализа антител, в частности, для дот-анализа на плоских подложках. Созданные на их основе наборы могут применяться для диагностики клещевого энцефалита в отдаленных районах со слабо развитой лабораторной инфраструктурой.

Литература


1. О состоянии санитарно-эпидемиологического благополучия населения в Российской Федерации в 2022 году: Государственный доклад. М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, 2023, 340 с. https://www.rospotrebnadzor.ru/documents/details.php?ELEMENT_ID=25076&ysclid=lw6gk5dg81393380238


(On the state of sanitary and epidemiological welfare of the population in the Russian Federation in 2022: State Report). Moscow, 2023. 340 p. (In Russ.). https://www.rospotrebnadzor.ru/documents/details.php?ELEMENT_ID=25076&ysclid=lw6gk5dg81393380238


2. Колясникова Н.М., Ишмухаметов А.А., Акимкин В.Г. Современное состояние проблемы клещевого энцефалита в России и мире. Эпидемиология и Вакцинопрофилактика 2023; 22(1): 104–23. DOI: 10.31631/2073-3046-2023-22-1-104-123


Kolyasnikova N.M., Ishmukhametov A.A., Akimkin V.G. (The current state of the problem of tick-borne encephalitis in Russia and the world). Epidemiology and Vaccinal Prevention 2023; 22(1): 104–23. (In Russ.). DOI: 10.31631/2073-3046-2023-22-1-104-123


3. Darwish N.T., Alias Y.B., Khor S.M. An introduction to dengue-disease diagnostics. TrAC Trends Analyt. Chem. 2015; 67: 45–55. DOI: 10.1016/j.trac.2015.01.005


4. Cleton N.B., Godeke G.J., Reimerink J., Beersma M.F., Franco L. Goeijenbier M.et al. Spot the Difference-Development of a Syndrome Based Protein Microarray for Specific Serological Detection of Multiple Flavivirus Infections in Travelers. PLOS Neglected Tropical Diseases 2015; 9(3): e0003580. DOI: 10.1371/journal.pntd.0003580


5. Полтавченко А.Г., Ерш А.В., Филатов П.В., Ушкаленко Н.Д. Мультиплексный дот-иммуноанализ в диагностике инфекционных заболеваний: Монография. Чебоксары: ООО «Издательский дом «Среда», 2022. 224 с. DOI: 10.31483/a-10421


Poltavchenko A.G., Ersh A.V., Filatov P.V., Ushkalenko N.D. (Multiplex dot-immunoassay in the diagnosis of infectious diseases: Monograph). Cheboksary: LLC «Publishing House «Sreda», 2022. 224 p. (In Russ.). DOI: 10.31483/a-10421


6. Полтавченко А.Г., Ерш А.В., Азаев М.Ш., Филатов П.В. Оптимизация условий проявления результатов дот-иммуноанализа в автономном наборе для выявления ортопоксвирусов. Эпидемиол. и инфекц. бол. 2019; 24(2): 77–83. DOI: 10.18821/1560-9529-2019-24-2-77-83


Poltavchenko A.G., Ersh A.V., Azaev M.S., Filatov P.V. (Optimization of the conditions for the development of the results of the dot-immunoassay in an autonomous kit for the detection of orthopoxviruses). Epidemiology and Infectious Diseases 2019; 24(2): 77–83. (In Russ.). DOI: 10.18821/1560-9529-2019-24-2-77-83


7. Poltavchenko A.G., Zaitsev B.N., Ersh A.V., Korneev D.V., Tarasov O.S., Filatov P.V. et al. The selection and optimization of the detection system for self-contained multiplexed dot-immunoassay. J. Immunoassay Immunochem. 2016; 37(5): 540–54. DOI: 10.1080/15321819.2016.1174134


8. Wu R., Yakhkeshi S., Zhang X. Scientometric analysis and perspective of IgY technology study. Poultry Science 2022; 101(4): 101713. DOI: 10.1016/j.psj.2022.101713


9. Yakhkeshi S., Wu R., Chelliappan B., Zhang X. Trends in industrialization and commercialization of IgY technology. Front. Immunol. 2022; 13: 991931. DOI: 10.3389/fimmu.2022.991931


10. Иванов А.П., Клеблеева Т.Д., Иванова О.Е. Опыт применения IgY-технологии для лабораторной диагностики вирусных инфекций. Вопросы вирусологии 2020; 65(1): 21–6. DOI: 10.36233/0507-4088-2020-65-1-21-26


Ivanov A.P., Klebleeva T.D., Ivanova O.E. (Experience of application of IgY-technology for laboratory diagnostics of viral infections). Problems of Virology 2020; 65(1): 21–6. (In Russ.). DOI: 10.36233/0507-4088-2020-65-1-21-26


11. Anthony B.F., Concepcion I.E., Concepcion N.F., Vadheim C.M., Tiwari J. Relation between maternal age and serum concentration of IgG antibody to type III group B streptococci. J. Infect. Dis. 1994; 170(3): 717–20. DOI: 10.1093/infdis/170.3.717


12. Granoff D.M., Shackelford P.G., Suarez B.K., Nahm M.H., Cates K.L., Murphy T.V. et al. Hemophilus influenzae type B disease in children vaccinated with type B polysaccharide vaccine. N. Engl. J. Med. 1986; 315(25): 1584–90. DOI: 10.1056/NEJM198612183152505


13. Bloom J.W., Wong M.F., Mitra G. Detection and reduction of protein A contamination in immobilized protein A purified monoclonal antibody preparations. J. Immunol. Methods 1989; 117(1): 83–9. DOI: 10.1016/0022-1759(89)90121-x


14. Gaspar-Castillo C., Rodríguez M.H., Ortiz-Navarrete V., Alpuche-Aranda C.M and Martinez-Barnetche J. Structural and immunological basis of cross-reactivity between dengue and Zika infections: Implications in serosurveillance in endemic regions. Front. Microbiol. 2023; 14: 1107496. DOI: 10.3389/fmicb.2023.1107496


15. Girl P., Bestehorn-Willmann M., Zange S., Borde J.P., Dobler G. Tick-borne encephalitis virus nonstructural protein 1 IgG enzyme-linked immunosorbent assay for differentiating infection versus vaccination antibody responses. J. Clin. Microbiol. 2020; 58(4): e01783-19. DOI: 10.1128/jcm.01783-19


16. Inagaki E., Sakai M., Hirano M., Muto M., Kobayashi S., Kariwa H. et al. Development of a serodiagnostic multi-species ELISA against tick-borne encephalitis virus using subviral particles. Ticks Tick Borne Dis. 2016; 7(5): 723–9. DOI: 10.1016/j.ttbdis.2016.03.002


17. Pulkkinen L.I.A., Barrass S.V., Domanska A., Överby A.K., Anastasina M., Butcher S.J. Molecular Organisation of Tick-Borne Encephalitis Virus. Viruses 2022; 14(4): 792. DOI: 10.3390/v14040792


18. Барышникова В.С., Турченко Ю.В., Шишова А.А., Климентов А.С., Тучинская К.К., Карганова Г.Г. Рекомбинантный гликопротеин E вируса клещевого энцефалита для создания дифференцирующей тест-системы. Биотехнология 2022; 38(6): 73–83. DOI: 10.56304/S0234275822060023


Baryshnikova V.S., Turchenko Yu.V., Shishova A.A., Klimentov A.S., Tuchynskaya K.K., Karganova G.G. (Recombinant Glycoprotein E of Tick-Borne Encephalitis Virus for a Developing Differentiated Test System). Biotechnology 2022; 38(6): 73–83. (In Russ.). DOI: 10.56304/S0234275822060023


19. Holbrook M.R., Shope R.E., Barrett A.D.T. Use of Recombinant E Protein Domain III-Based Enzyme-Linked Immunosorbent Assays for Differentiation of Tick-Borne Encephalitis Serocomplex Flaviviruses from Mosquito-Borne Flaviviruses. J. Clin. Microbiol. 2004; 42(9): 4101–10. DOI: 10.1128/JCM.42.9.4101-4110.2004


20. Ludolfs D., Reinholz M., Schmitz H. Highly specific detection of antibodies to tick-borne encephalitis (TBE) virus in humans using a domain III antigen and a sensitive immune complex (IC) ELISA. J. Clin. Virol. 2009; 45(2): 125‒8. DOI: 10.1016/j.jcv.2009.03.016


Об авторах / Для корреспонденции


Полтавченко Александр Георгиевич – д.б.н., ведущий научный сотрудник, ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р.п. Кольцово, Новосибирская область, Россия; poltav@vector.nsc.ru; https://orcid.org/0000-0003-2408-5611
Филатов Павел Владимирович – к.б.н., научный сотрудник, ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р.п. Кольцово, Новосибирская область, Россия; filatov_pv@vector.nsc.ru; https://orcid.org/0000-0001-7763-3808
Ерш Анна Васильевна – к.б.н., научный сотрудник, ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р.п. Кольцово, Новосибирская область, Россия; ersh_av@vector.nsc.ru; https://orcid.org/0000-0002-9220-1250
Ушкаленко Никита Дмитриевич – аспирант, младший научный сотрудник, ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р.п. Кольцово, Новосибирская область, Россия; ushkalenko_nd@vector.nsc.ru; https://orcid.org/0000-0002-2171-7444
Шаньшин Даниил Васильевич – младший научный сотрудник, ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р.п. Кольцово, Новосибирская область, Россия; shanshin_dv@vector.nsc.ru; https://orcid.org/0000-0001-9985-1582
Колосова Евгения Андреевна – младший научный сотрудник, ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р.п. Кольцово, Новосибирская область, Россия; kurchanovaea@gmail.com; https://orcid.org/0000-0002-8967-4719
Щербаков Дмитрий Николаевич – к.б.н., ведущий научный сотрудник, ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р.п. Кольцово, Новосибирская область, Россия; scherbakov_dn@vector.nsc.ru; https://orcid.org/0000-0001-8023-4453


Похожие статьи


Бионика Медиа