В 2022 г. случаи заболевания людей лихорадкой Западного Нила (ЛЗН) отмечены во многих регионах мира. В Европейском союзе, по данным ECDC, было зафиксировано 1133 случая заболевания ЛЗН, из них 92 – с летальным исходом [1], в США – 1035 случаев ЛЗН, диагностированных в 41 штате [2].
По данным Референс-центра по мониторингу за ЛЗН, на территории Российской Федерации в 2022 г. зарегистрировано 33 случая болезни в 16 субъектах шести федеральных округов: Центральном – 17 случаев, Южном – 6, Северо-Кавказском –5, Приволжском и Уральском – по 2 случая, Сибирском – 1 случай [3].
В Южном федеральном округе в последние годы сохраняется напряженная эпидемическая ситуация по ЛЗН [4]. В сезон 2022 г. эпизоотические проявления ЛЗН установлены в шести субъектах округа: республиках Калмыкия и Крым, Краснодарском крае Волгоградской, Ростовской и Астраханской областях [5].
Случаи заболевания людей ЛЗН официально регистрируют в Ростовской области (РО) с 1999 г. [6]. Основные переносчики ЛЗН – кровососущие комары – представлены 24 видами родов Anopheles, Coquillettidia, Aedes и Culex [7]. Климатические условия РО благоприятны для циркуляции вируса Западного Нила (ВЗН) вне зависимости от годовых колебаний температуры [8, 9].
На территории РО с 2018 по 2022 г. зарегистрировано 122 случая ЛЗН: в 2018 г. – 25 случаев, в 2019 г. – 93, в 2020 г. – ни одного случая, что, возможно, связано с введением ограничительных мероприятий по COVID-19, в 2021 и 2022 г. – по 2 случая. Заболевания регистрировали на 18 территориях области: в городах Ростов-на-Дону (2018, 2019, 2022 гг.), Батайск (2018, 2019, 2021 гг.), Волгодонск (2022 г.), Каменск-Шахтинский (2018 г.), Новошахтинск (2018, 2019 гг.), Таганрог (2019 г.), Шахты (2019 г.); в районах Азовский (2019, 2021 гг.), Аксайский (2018, 2019 гг.), Веселовский (2019 г.), Егорлыкский (2018 г.), Каменский (2019 г.), Красносулинский (2018 г.), Матвеево-Курганский (2019 г.), Мясниковский (2019 г.), Неклиновский (2018, 2019 гг.), Сальский (2019 г.), Чертковский (2019 г.) [10].
Широкое территориальное распространение ЛЗН в РО определяет значимость этой нозологии для региона.
Цель исследования – оценка результатов эпидемиологического мониторинга ЛЗН на территории РО в 2022 г.
Материалы и методы
В работе использованы материалы мониторинговых исследований, проведенных в 2022 г. специалистами Ростовского-на-Дону противочумного института Роспотребнадзора. Эпизоотологические обследования проведены на территории 33 районов РО: Азовского, Аксайского, Багаевского, Белокалитвенского, Боковского, Верхнедонского, Веселовского, Дубовского, Заветинского, Зерноградского, Зимовниковского, Кагальницкого, Каменского, Кашарского, Красносулинского, Куйбышевского, Матвеево-Курганского, Миллеровского, Морозовского, Неклиновского, Октябрьского, Орловского, Песчанокопского, Пролетарского, Ремонтненского, Родионово-Несветайского, Сальского, Тарасовского, Тацинского, Усть-Донецкого, Целинского, Чертковского, Шолоховского и рекреационных зонах городов Азова, Донецка, Ростова-на-Дону.
Отлов и учет мелких млекопитающих и птиц проведен в соответствии с нормативными документами1, видовую принадлежность кровососущих членистоногих устанавливали с помощью определителей [11, 12].
Отловлено и исследовано 1688 экземпляров мелких млекопитающих (ММ) 14 видов: малая белозубка Crocidura suaveolens, малая бурозубка Sorex minutus, обыкновенная бурозубка Sorex araneus, восточноевропейская полевка Microtus rossiaemeridionalis, рыжая полевка Myodes glareolus, обыкновенная полевка Microtus arvalis, общественная полевка Microtus socialis, домовая мышь Mus musculus, курганчиковая мышь Mus spicilegus, европейская лесная мышь Sylvaemus sylvaticus, малая лесная мышь Sylvaemus uralensis, желтогорлая мышь Sylvaemus flavicollis, желтобрюхая мышь Sylvaemus fulvipectus, серый хомячок Cricetulus migratorius.
Добыто 118 экземпляров диких птиц 8 видов: речная крачка Sterna hirundo, хохотунья Larus cachinnans, белощекая крачка Chlidonias hybrida, большая поганка Podiceps cristatus, большой баклан Phalacrocorax carbo, озерная чайка Chroicocephalus ridibundus, серая цапля Ardea cinerea, грач Corvus frugilegiis.
Отловлено 1144 экземпляров комаров родов Aedes и Culex, относящихся к 9 видам: Aedes sticticus, А. cataphylla, A. cantans, A. caspius, A. annulipes, A. cinereus, A. flavescens, A. vexans, Culex modestus.
Собрано 684 экземпляров иксодовых клещей 6 видов: Dermacentor marginatus, D. reticulatus, Hyalomma marginatum, H. punctata, Ixodes ricinus, Rhipicephalus rossicus.
Формирование и исследование проб от позвоночных и беспозвоночных проводили в соответствии с действующими нормативными документами2.
При лабораторном исследовании проб полевого материала для выявления антигенов ВЗН применяли ИФА, для обнаружения специфических фрагментов РНК – ПЦР. При проведении ИФА использовали набор реагентов для выявления антигенов вируса ЛЗН и антител к нему методом ИФА «Био Скрин-ВЗН (АG)». При проведении ПЦР использовали набор реагентов для выявления РНК ВЗН в биологическом материале методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией «АмплиСенс®WFL-FL» (Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Россия).
Исследование уровня иммунной прослойки населения РО проводили в соответствии с СанПиН 3.3686-213. В 2022 г. методом ИФА протестировано 484 сыворотки крови доноров из 7 административных районов области: Сальского, Неклиновского, Веселовского, Заветинского, Ремонтненского, Целинского, Азовского и Ростова-на-Дону. При отборе учитывали постоянное проживание доноров на различных административных территориях РО и отсутствие в анамнезе перенесенных ранее природно-очаговых инфекций. Биоматериал получен в соответствии с принципами законности и соблюдения этических норм. Образцы тестировали на антитела классов М и G к ВЗН с использованием коммерческих наборов «ВектоНил-IgG», «ВектоНил-IgG-авидность» и «ВектоНил-IgМ» производства АО «Вектор-Бест» (Новосибирск). Для оценки концентрации специфических антител класса М в исследуемых образцах рассчитывали коэффициент позитивности (КП) – отношение величины оптической плотности (ОП) исследуемой сыворотки к значению ОП отрицательного контрольного образца. Антитела класса G к вирусу клещевого энцефалита (КЭ) определяли с помощью тест-системы «Вектор ВКЭ-IgG». Оптическую плотность измеряли на регистрирующем фотометре Infinite F50 (Tecan, Австрия).
Для статистической обработки данных использовали пакет MS Excel. Доверительные интервалы для доли положительных проб рассчитывали по методу Уилсона при уровне доверительной вероятности p ≥ 0,95, с использованием программных средств, предоставляемых сайтом https://epitools.ausvet.com.au.
Результаты
В 2022 г. эпизоотологический мониторинг за циркуляцией ВЗН в популяциях носителей и переносчиков проводили в различных природных биотопах РО. В табл. 1 представлены сводные данные по результатам лабораторных исследований на наличие маркеров ВЗН, выявленных в пробах методами ИФА и ПЦР.
Исследовано 1144 комара родов Aedes и Culex. Методом ИФА выявлена одна положительная проба с маркерами ВЗН – A. cataphylla в Тарасовском районе. Доля положительных проб при исследовании комаров составила 1,7%.
При лабораторном исследовании 684 экземпляров иксодовых клещей молекулярно-генетическим методом были получены положительные результаты в пробах преимагинальных стадий H. marginatum, снятых с грачей, – в 8 пробах в Сальском районе и 2 пробах в Пролетарском районе и методом ИФА – D. reticulatus в одной пробе в Неклиновский районе.
При тестировании биологического материала от птиц (118 экземпляров) маркеры ВЗН не обнаружены.
Маркеры ВЗН (антиген в ИФА) обнаружены в 5 пробах ММ: малая белозубка (1), обыкновенная полевка (1), отловленных в Неклиновском районе; малая лесная мышь (2) и рыжая полевка (1) – в Шолоховском районе. РНК ВЗН в ПЦР выделена в 4 пробах ММ: домовая мышь (Неклиновский район), лесная малая мышь (Тарасовский, Миллеровский, Каменский районы – по одной пробе). В целом при исследовании ММ положительные находки маркеров ВЗН (антигены в ИФА и РНК в ПЦР) получены в 9 (1,8%) пробах в Тарасовском, Миллеровском, Каменском, Неклиновском, Шолоховском районах области.
Серологический скрининг на наличие IgМ и IgG выборочных групп здорового населения проведен на территории 7 административных районов области и Ростове-на-Дону (табл. 2). IgМ обнаружены в 1,9% (1,0–3,5) случаев. Медиана возраста сероположительных доноров составила 59 лет. В положительных образцах КП варьировал от 1,1 до 8,8, что может свидетельствовать об острой фазе заболевания ЛЗН. КП составил в среднем 4,3. Положительные серологические пробы среди здорового населения обнаружены в Неклиновском (2,0%), Веселовском (2,8%), Азовском (4,8%), Заветинском (2,5%) районах и Ростове-на-Дону (2,2%).
IgG к ВЗН обнаружены в 12,4% (9,8–15,6) случаев. Медиана возраста серопропозитивных доноров составила 54 года. Серопревалентность к ВЗН отмечалась в равной степени среди мужчин и женщин. Средняя величина КП для сывороток, учтенных как положительно реагирующие, составила 11,73. В 81,7% случаев КП был выше 12,0. Уровень иммунной прослойки населения в Веселовском районе составил 22,2%, в Ростове-на-Дону – 18,0%, Неклиновском районе – 12,2%, Сальском – 11,8%, Азовском – 9,7%, Заветинском – 7,5%. Отсутствие серопозитивных проб в Ремонтненском районе в 2022 г. нуждается в уточнении, поскольку в исследованиях, проведенных в 2020 г., IgG к ВЗН обнаружены в 9,1% проб [13].
В положительных пробах дополнительно определяли индекс авидности, позволяющий дифференцировать острое заболевание от перенесенного ранее. Индекс авидности более 60% интерпретируется как ранее перенесенная инфекция (более 6 мес.), в настоящем исследовании доля таких проб составила 76,7%. Индекс авидности не более 40% свидетельствует об остром процессе (не более 3–5 мес.), доля низкоавидных образцов составила 23,3%.
В 6 пробах выявлено одновременное присутствие IgM и IgG: Азовский (2), Заветинский (1), Веселовский (1) районы и Ростов-на-Дону (2). Образцы из Заветинского района (1) и Ростова-на-Дону (1) были низкоавидные, что указывает на недавно перенесенную инфекцию.
Учитывая наличие перекрестных антигенных связей между вирусами ЗН и КЭ [14], проведено параллельное обследование на IgG к КЭ. При оценке 60 позитивных результатов серологических исследований сывороток крови доноров антитела в титре 1:100 к возбудителю КЭ обнаружены в 2 сыворотках крови из Неклиновского района (женщины старше 80 лет) при этом индекс авидности к ВЗН в этих образцах составил 100%, IgМ отсутствовали.
Обсуждение
В 2022 г. на наличие маркеров ВЗН исследовано 3634 экземпляра носителей и переносчиков. Доля положительных проб составила: ММ – 1,8%, комары – 1,7%, клещи – 18,0%.
Совместно со специалистами Волгоградского научно-исследовательского противочумного института Роспотребнадзора положительные пробы полевого материала от комаров A. caspius и клещей I. ricinus, собранные в Азовском районе, были направлены для молекулярно-генетического исследования в Референс-центр по мониторингу за возбудителем ЛЗН. По результатам типирования установлена принадлежность выделенных фрагментов РНК ВЗН ко 2-му генотипу, который является патогенным для человека, птиц и некоторых видов млекопитающих [15].
На протяжении многих лет при невысоком уровне заболеваемости ЛЗН в РО в сыворотках крови здоровых доноров выявляли IgG к ВЗН. В период с 2000 по 2004 г. в результате обследования методом ИФА сывороток крови 2364 жителей области антитела были обнаружены в 3,4% (2,7–4,2) случаев [16, 17].
С 2009 по 2013 г. исследовано 1890 сывороток крови в 30 муниципальных районах и 11 городах РО. Антитела к ВЗН выявлены в 18 районах и 12 городах, суммарная доля серопозитивных сывороток составила 7,9% (6,8–9,2) [18].
В 2020 г. исследовано 419 проб доноров, проживающих на 8 территориях РО. Несмотря на отсутствие регистрации случаев заболевания, антитела к ВЗН в высоких титрах обнаружены в 8,7% (6,2–12,1) случаев [19].
В 2021 г. скрининговое исследование 424 сывороток крови здоровых доноров, проживающих на 10 административных территориях, выявило положительные пробы в 9,9% (7,4–13,1) случаев [20].
Суммарные показатели серопревалентности с 2020 по 2022 г. составили 10,4% (8,0–12,2). На рисунке показано, как менялся уровень антител к ВЗН в РО в периоды 2000–2004, 2009–2013 и 2020–2022 гг. Наблюдаются статистически значимые (p ≥ 0,95) изменения доли серопозитивных проб среди здорового населения РО с 2000–2004 по 2020–2022 гг., в интервале с 2009–2013 по 2020–2022 гг., учитывая суммарные данные, нельзя сказать о достоверном изменении уровня антител в регионе.
В 2022 г. показатель серопревалентности по РО был наиболее высоким за все время наблюдений и составил 12,4%. Частое выявление серопозитивных проб можно объяснить тем, что большинство (до 80,0%) людей, инфицированных ВЗН, не имеют клинической манифестации. Зачастую факт перенесенной болезни остается неустановленным [20, 21]. Проведенный анализ клинико-эпидемиологических особенностей ЛЗН в РО среди лихорадящих больных, находившихся на лечении в инфекционных стационарах Ростова-на-Дону в период с 2007 по 2018 г., показал, что при поступлении в направлениях фигурировали такие диагнозы, как лихорадка неясного генеза (26,7%), острые респираторно-вирусные инфекции (18,9%), инфекция неясной этиологии (7,7%), лептоспироз (6,7%), менингит (5,5%), острые кишечные инфекции (3,3%) и др. [22]. Подтверждением этих данных служит также высокий процент расхождений предварительного и окончательного диагнозов ЛЗН в других исследованиях [23, 24]. Гиподиагностику ЛЗН можно также объяснить тем, что IgM появляются в сыворотке больных между 3-м и 8-м днем после появления симптомов, поэтому раннее тестирование может дать ложноотрицательный результат [25].
Выводы:
1. В 2022 г. при лабораторном исследовании полевого материала на наличие ВЗН положительные находки получены в Тарасовском, Сальском, Неклиновском, Пролетарском, Миллеровском, Каменском, Шолоховском районах области, в целом суммарная инфицированность носителей и переносчиков составила 3,1%. Полученные данные свидетельствуют об активности эпизоотологического процесса в природных очагах ЛЗН в РО. Наличие установленных переносчиков и носителей ВЗН определяет риски инфицирования населения.
2. Суммарная серопревалентность в 2022 г. составила 12,4%, что является самым высоким показателем за все время наблюдений. Административные районы РО с наибольшей долей серопозитивных результатов отмечены на территориях высокой степени обводненности, где сложились условия для существования всех компонентов природного очага. Контакты населения с ВЗН подтверждаются выявлением специфических IgG у здоровых доноров в Веселовском, Неклиновском районах и Ростове-на-Дону. Обнаружение низкоавидных образцов сывороток доноров из Заветинского района и Ростова-на-Дону указывает на недавно перенесенную инфекцию.
3. Регистрация случаев болезни, наличие иммунной прослойки среди здоровых доноров в совокупности с данными о спонтанной инфицированности ВЗН комаров, клещей и ММ свидетельствует о сохраняющейся активной циркуляции ВЗН на территории РО и актуальности дальнейших исследований.
